在細(xì)菌生長代謝過程中PE的生長方式

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考慮到細(xì)菌生長和產(chǎn)毒的營養(yǎng)要求不同，將培養(yǎng)基分為生長培養(yǎng)基和產(chǎn)毒培養(yǎng)基兩種，并對培養(yǎng)基成分作了如下改進：加入葡萄糖增加碳源和能量，促進細(xì)菌生長；產(chǎn)毒培養(yǎng)基中加大甘油量至2.0%，促進PE基因轉(zhuǎn)錄；加入NTA抑制胞外蛋白酶活性；硫酸亞鐵濃度保持在1mmolL，既有利于細(xì)菌生長，又不致于影響毒素的產(chǎn)生。培養(yǎng)條件方面，小瓶培養(yǎng)振蕩次數(shù)從120rmin提高到180rmin，大瓶培養(yǎng)通氣量維持在30～40Lmin，以提高培養(yǎng)基含氧量，這些改進為高水平毒素的形成提供了物質(zhì)基礎(chǔ)?！　E在細(xì)菌生長代謝過程中形成，細(xì)菌生長活躍是毒素合成量提高的必要條件，因此，我們采用兩步法活躍種子，并對菌齡和接種菌量進行了比較.一代種子菌齡對綠膿桿菌生長的影響：比較一代種子17h和24h菌齡對二代種子增殖的影響發(fā)現(xiàn)，菌齡對二代種子菌量的影響無差異，但17h菌齡遲緩期較短，培育6h已達(dá)到對數(shù)生長末期，步入穩(wěn)定期.種子活化以細(xì)菌達(dá)到對數(shù)生長末期為最佳，所以我們選用17h肉湯瓊脂斜面培養(yǎng)物作為第一代種子，6h培養(yǎng)物為二代種子.　　二代種子接種量對產(chǎn)毒的影響：在50ml產(chǎn)毒培養(yǎng)基中分別接種0.1ml、1ml、10ml二代種子，觀察產(chǎn)毒培養(yǎng)基中細(xì)菌生長和PE形成情況，結(jié)果顯示，0.1ml接種量組細(xì)菌生長遲緩且量少，1ml和10ml接種量兩個組相平行，10ml組培養(yǎng)物中菌濃度高于1ml組，從接種量對以后產(chǎn)毒影響來看，1ml接種量組比10ml接種量組產(chǎn)毒穩(wěn)定，所以我們選用每50ml產(chǎn)毒培基1ml種子的接種量。